旋毛虫钙网蛋白的表达和生物学特性鉴定

目的 克隆表达旋毛虫钙网蛋白(TsCRT),并对其生物学特性进行鉴定.方法 通过RT-PCR扩增TsCRT基因,构建重组质粒pMD19T-TsCRT,测序正确后亚克隆至表达载体pQE80L,构建重组表达载体pQE80L-TsCRT,转化大肠埃希菌BL21(DE3),以异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,通过Western blot、qPCR和免疫荧光试验(IFT)鉴定rTsCRT的反应原性及其在不同虫期的表达与组织定位,通过动物免疫试验观察rTsCRT的免疫原性.结果 成功构建重组表达载体pQE80L-TsCRT,转化DE3后经IPTG诱导表达相对分子质量为47×103的rTsCRT蛋白.用纯化的rTsCRT免疫小鼠3次,血清抗体效价达1 ∶105.Western blot显示,rTsCRT可被抗rTsCRT血清和旋毛虫感染小鼠血清识别.qPCR检测显示,TsCRT在旋毛虫肌幼虫、肠道感染性幼虫、成虫和新生幼虫期均有转录和表达.IFT试验显示,TsCRT主要定位在旋毛虫的表皮和胚胎中.结论 TsCRT在旋毛虫不同虫期均有表达,重组表达的rTsCRT具有良好的抗原性,可作为制备抗旋毛虫疫苗及血清学诊断的候选靶抗原.