二氢杨梅素通过线粒体途径及影响ROS-NF-κB信号通路诱导心肌细胞AC16凋亡

目的 探讨二氢杨梅素(dihydromyricetin,DMY)对人源正常心室肌细胞AC16毒性作用及其机制.方法 采用CCK-8法检测不同质量浓度的DMY对心肌细胞AC16存活率的影响,后选取低、中、高3个质量浓度(30、60、90 mg·L-1)DMY处理AC16细胞,采用流式细胞术(flow cytometry,FCM)检测细胞凋亡率、细胞活性氧(reactive oxygen species,ROS)生成水平.酶标仪检测细胞外液中乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)、谷草转氨酶(aspartate transaminase,AST)、细胞内超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD),以及过氧化氢酶(catalase,CAT)变化.通过激光共聚焦及FCM共同检测细胞线粒体膜电位变化,蛋白印迹法检测相关蛋白包括核转录因子-κB(nuclear factor kappa B,NF-кB)p65、p-NF-кB p65、核转录因子-кB 抑制蛋白 α(inhibitor proteinα of kappa B,IкBα)、p-IкBα 及凋亡相关蛋白包括 B 淋巴细胞瘤-2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)、Bcl2 相关蛋白 x(Bcl2-associated x,Bax)及剪切型半胱氨酸蛋白水解酶-3(cleaved-cysteinyl aspar-tate specific proteinase-3,cleaved-caspase-3)的表达水平.结果 DMY致心肌损伤的最佳处理时间为24 h,AC16细胞的存活率降低,凋亡率增加,细胞外液中LDH及AST含量的上调、细胞内SOD及CAT酶活性的降低均呈现与浓度相关的剂量依赖效应,线粒体膜电位下降伴随ROS释放的增加提示线粒体功能受损严重.此外,细胞凋亡率的增加伴随p-IкBα、p-NF-κB p65、cleaved-caspase-3表达水平的显著上调及Bcl-2/Bax比值下调趋势.结论 二氢杨梅素通过ROS-NF-кB信号通路轴及线粒体途径诱导心肌细胞凋亡,造成细胞毒性.