后肾间充质细胞作用于VEGFR2/3促进成骨细胞成骨

目的:探讨后肾间充质细胞(MMC)及其上清液和其活性成分VEGF-C所作用受体VEGFR2/3对成骨细胞成骨的影响.方法:将MMC与成骨细胞系MC3T3-E1混合培养,检测成骨标志物碱性磷酸酶(ALP)活性与染色情况;茜素红染色法观察矿化结节形成情况.制备MMC上清液,将成骨细胞分为成骨诱导对照组和MMC上清液组,CCK-8法检测细胞增殖活性;检测ALP活性、染色情况与矿化结节形成情况;蛋白质印记法检测成骨相关蛋白Runx2、OCN、OPN的表达水平.加入VEGFR2和VEGFR3的特异性抑制剂Ki8751和MAZ51后,通过检测上述指标观察其促成骨作用有无减弱.结果:混合培养使成骨细胞ALP活性升高、染色增强,细胞表面矿化结节数量增多、体积增大.加入MMC上清液后,成骨细胞增殖活性升高,ALP活性升高、染色增强,Runx2、OCN、OPN表达升高,矿化结节数量增多、体积增大.抑制VEGFR2/3后,MMC上清液的促成骨作用减弱,ALP活性下降、染色减弱,Runx2、OCN、OPN的表达下降,细胞表面矿化结节数量减少、体积减小.结论:MMC可通过作用于VEGFR2/3促进成骨细胞成骨.