组蛋白去乙酰化酶抑制剂Chidamide抑制C2C12骨骼肌细胞分化及其机制

目的:探讨组蛋白去乙酰化酶抑制剂西达苯胺(Chidamide)对C2C12 小鼠骨骼肌细胞分化作用及其分子机制.方法:CCK-8(cell counting Kit-8)法检测 0、0.5、1、2、4 μmol/L Chidamide处理后C2C12 细胞的活力;将C2C12 骨骼肌细胞分为对照组(control)和Chidamide组,Western印迹检测Chidamide处理后组蛋白H3 乙酰化(Pan-acetyl H3)水平,细胞免疫荧光染色肌管细胞分化成熟标志蛋白肌球蛋白重链(MyHC),检测肌细胞分化,Western印迹和qPCR检测MyHC、成肌分化抗原(MyoD)、肌细胞生成素(MyoG)的表达及肌原纤维Ⅰ型(Myh7)、Ⅱa型(Myh2)、Ⅱb型(Myh4)和Ⅱx型(Myh1)的表达.结果:0、0.5、1、2、4 μmol/L的Chidamide均不影响细胞活力.Chidamide升高Pan-acetyl H3蛋白水平(t=3.22,P<0.05).细胞免疫荧光结果显示,与对照组相比,Chidamide处理后肌细胞融合受损,分化程度降低.Western印迹和qPCR结果显示,与对照组相比,Chidamide下调MyHC、MyoD和MyoG蛋白水平(t=5.71、6.05、7.37,均P<0.01)和mRNA水平(t=26.87、5.81、4.86,均P<0.01);降低Myh7 蛋白(t=3.93,P<0.01)和mRNA水平(t=4.85,P<0.01);降低Myh1、Myh2蛋白(t=14.13、5.05,均P<0.01)和mRNA水平(t=15.48、16.82,均P<0.001),但不影响Myh4 的蛋白(t=2.19,P>0.05)和mRNA水平(t=1.50,P>0.05).结论:Chidamide可能通过下调MyoD和MyoG的表达抑制C2C12骨骼肌细胞分化,且主要抑制Ⅰ型、Ⅱa和Ⅱx型肌原纤维,不影响Ⅱb型肌原纤维.