活性口袋关键色氨酸对几丁质酶Chi304催化性质的研究

几丁质酶中存在结合口袋及水解活性位点,关键氨基酸与底物几丁质的结合可调控酶的水解活性.以嗜热几丁质酶Chi304为研究材料,采用同源建模分析其高级结构,发现在其底物结合口袋附近存在2个色氨酸(W140与W272),将其定点突变为丙氨酸后,采用高效液相色谱检测酶的水解产物,并进一步分析水解产物三乙酰壳三糖(DP3)与二乙酰壳二糖(DP2)的比例(DP3/DP2),用于评估突变体的效果.结果表明,突变体W140A、W272A与W140/272A水解胶体几丁质产物DP3/DP2分别较野生型提升23.3％、45.7％与80.0％.由此表明,W140与W272是影响酶与底物结合的关键氨基酸,将其突变为丙氨酸可提升Chi304的内切活力,降低外切活力.