LIPI-4 EⅡ C调控单增李斯特菌关键毒力因子转录的研究

[目的]探究单增李斯特菌(LM)毒力岛4(LIPI-4)中膜透性酶ⅡC(EⅡC)对LM关键毒力基因表达的影响.[方法]构建分离株LM928 EⅡC基因缺失株LM9284EⅡ C和回补菌株CLM928△EⅡ C,测定各菌株的生长曲线和对不同糖的发酵情况,测定侵染人脑微血管内皮细胞(HCMEC/D3)后的黏附、侵袭和胞内增殖能力,利用实时荧光定量PCR方法检测在脑心浸液(BHI)培养条件下和侵染HCMEC/D3后各菌株毒力基因的转录水平.[结果]成功构建LM928 EⅡ C基因缺失株LM928△EⅡ C和回补菌株CLM928△EⅡ C.EⅡC基因的缺失不影响LM928的生长和对葡萄糖、纤维二糖、果糖、鼠李糖、七叶苷和水杨苷的发酵.EⅡ C基因缺失后,LM928对HCMEC/D3的侵袭率极显著下降(P＜0.01),黏附能力无显著变化(P＞0.05).LM928△EⅡC胞内增殖菌量在2～4 h时显著低于LM928和CLM928△EⅡ C(P＜0.05),但在8～12 h时均显著高于LM928和CLM9284EⅡ C(P＜0.05).在BHI培养条件下,LM928△EⅡ C毒力基因hly、prfA、actA、plcB、inlA、inlB、inlC和mpl转录水平极显著下调(P＜0.01),毒力基因plcA转录水平极显著上调(P＜0.01);在侵染HCMEC/D3后,LM928△EⅡ C毒力基因hly、prfA、inlB、inlC和mpl转录水平相对于LM928和CLM928△EⅡ C显著或极显著上调(P＜0.05;P＜0.01),毒力基因plcA和inlA相比于CLM928△EⅡC极显著下调(P＜0.01),毒力基因actA和plcB转录水平无显著差异(P＞0.05).[结论]LIPI-4中EⅡC不参与LM928的生长及其对部分糖的发酵,能调控LM中重要的侵袭相关基因和毒力相关基因.本试验结果为进一步探究EⅡC在LM和LIPI-4中的作用奠定基础.