细粒棘球绦虫EGR-07243和EGR-07244基因生物信息学分析及原核表达

[目的]分析细粒棘球绦虫(Echinococcus granulosus)2个Kunitz型丝氨酸蛋白酶抑制剂基因EGR-07243和EGR-07244的生物信息学特性,并进行原核表达,以期检测EGR-07243和EGR-07244蛋白的免疫原性.[方法]利用PCR扩增EGR-07243、EGR-07244基因全长序列,采用生物信息学软件对EGR-07243、EGR-07244蛋白的理化性质、结构特点及亲缘进化关系进行分析;构建重组质粒pET32a-EGR-07243、pET32a-EGR-07244并转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,利用SDS-PAGE检测蛋白的表达,并通过Western blotting对蛋白进行抗原性分析.[结果]EGR-07243基因全长228 bp,编码75个氨基酸,蛋白分子式为C686 H1146N228O292S63,相对分子质量约19 258,含有3个B细胞抗原表位,理论等电点为5.30,脂肪系数为17.98,亲水性为0.714,为稳定蛋白;EGR-07244基因全长228 bp,编码75个氨基酸,蛋白分子式为C675H1124N228O287S56,相对分子质量约18 800,含有3个B细胞抗原表位,理论等电点为5.32,脂肪系数为20.61,亲水性为0.689,为稳定蛋白.二者氨基酸序列相似性为72.00％.二者与绦虫属的功能结构域氨基酸序列一致性为95％以上,亲缘关系极近;而与人的功能结构域氨基酸序列一致性为46.3％,亲缘关系较远.通过双酶切鉴定及测序分析证明,pET32a-EGR-07243、pET32a-EGR-07244重组质粒构建成功.重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞后成功诱导表达蛋白,Western blotting结果显示,2种蛋白能被感染原头蚴的犬阳性血清识别且不被健康犬血清识别,表明其均具有良好的反应原性.[结论]EGR-07243和EGR-07244蛋白能够作为预防细粒棘球绦虫感染的疫苗免疫靶点,结果为抗包虫病疫苗候选分子的筛选提供了试验材料.