CLOCK氧化还原修饰介导内源性H2O2对小鼠细胞呼吸的调节作用

目的 探究生物钟核心转录因子昼夜节律运动输出周期蛋白(CLOCK)介导内源性过氧化氢(H2 O2)对细胞呼吸的调节作用和机制.方法 利用Seahorse细胞能量代谢分析仪检测ClockC195S小鼠胚胎成纤维细胞(MEFs)和成体成纤维细胞(MAFs)细胞氧耗能力和糖酵解能力;通过q-PCR检测细胞呼吸关键代谢酶基因表达水平;MEFs进行抗氧化剂Trolox处理后,用Amplex?Red试剂盒检测内源性H2 O2的含量,并通过生物素碘乙酰胺(BIAM)探针标记检测CLOCK蛋白氧化还原修饰的改变,进一步检测处理后的细胞氧耗能力和细胞呼吸关键代谢酶基因表达水平.结果 ClockC195S细胞氧耗能力和糖酵解能力下降,烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD)合成关键酶烟酰胺单核苷酸腺苷转移酶(NMNAT2)表达降低(P<0.05),NAD含量下降;Trolox处理导致细胞内源性H2O2含量降低,Clockwt MEFs氧耗能力降低而ClockC195S MEFs变化无统计学意义.结论 CLOCK蛋白可以通过195位点半胱氨酸氧化还原修饰介导内源性H2 O2对细胞呼吸的调节作用.