诱导型巨噬细胞特异性敲除GRK2基因小鼠模型的构建及应用

目的 建立诱导型巨噬细胞特异性敲除G蛋白偶联受体激酶2(GRK2)基因(GRK2 flox/flox Lyz2-CreERT+)小鼠模型.方法 基于Cre/LoxP系统构建GRK2 flox flox Lyz2-Cre-ERT+小鼠.通过PCR扩增程序及琼脂糖凝胶电泳鉴定GRK2 flox flox Lyz2-CreERT+小鼠的基因型.二氧化碳法处死小鼠后,Western blot检测骨髓源巨噬细胞(BMDMs)和腹腔巨噬细胞(PMs)中GRK2表达.免疫荧光检测小鼠脑、心脏和脾脏巨噬细胞中GRK2表达.流式细胞术分析前列腺素E2(PGE2)诱导的PMs中M1/M2比例.结果 基因型鉴定结果表明,flox扩增产物长度在355 bp处有一条条带且Cre扩增产物长度在355 bp处有一条条带的小鼠即为GRK2 flox/flox Lyz2-CreERT+小鼠.Western blot结果显示,与GRK2 flox/flox小鼠相比,GRK2 flox/flox Lyz2-CreERT+小鼠BMDMs和PMs中GRK2表达降低(P<0.01).免疫荧光结果显示,与GRK2flox flox小鼠相比,GRK2flox/flox Lyz2-CreERT+小鼠脑、心脏和脾脏中GRK2表达降低(P<0.01).流式细胞术结果显示,与GRK2 flox/flox小鼠相比,GRK2 flox/flox Lyz2-CreERT+小鼠PMs中CD86/CD206比例变化差异无统计学意义.在PGE2(10μmol/L)刺激下,GRK2flox/flox Lyz2-CreERT+小鼠PMs中CD86/CD206比例升高(P<0.01),且GRK2 flox/flox小鼠PMs中CD86/CD206比例高于GRK2 flox/flox Lyz2-CreERT+小鼠(P<0.01).结论 该研究成功构建出GRK2flox/flox Lyz2-Cre-ERT+小鼠模型,且该小鼠可促进PGE2诱导的PMs向M2型巨噬细胞极化.