Effects of External Administration of Pizhan Powder(皮粘散)and Its Disassembled Formula on Wound Healing and Wnt/β-catenin Signaling Pathway in Wound Tissue of Chronic Skin Ulcer Model Rats

目的 探讨皮粘散治疗慢性皮肤溃疡的可能作用机制及配伍意义.方法 将24只SD大鼠随机分为模型组、皮粘散组、水牛皮组、硼砂组,每组6只.各组大鼠通过冰醋酸涂抹缺损性创面制作慢性皮肤溃疡大鼠模型.造模后皮粘散组、水牛皮组、硼砂组分别予以0.2g药粉均匀地涂抹在溃疡部位,每天换药1次,连续干预21天;模型组不做处理.分别在给药前以及给药的第7、14、21天记录大鼠皮肤溃疡创面面积,计算创面愈合率,并进行溃疡色泽、溃疡分泌物、溃疡肉芽组织评分;末将给药次日采用HE染色观察皮肤组织全层的病理变化;免疫荧光检测大鼠局部溃疡组织中血小板-内皮细胞黏附分子(CD31)、Ⅲ型胶原蛋白(CollagenⅢ)的表达;RT-qPCR法检测大鼠皮肤溃疡创面组织Wnt/β-catenin信号通路相关基因[Wnt家族蛋白4(Wnt4)、连环蛋白β1(Ctnnb1)、G1/S-特异性周期蛋白-D1(Ccnd1)、神经钙黏素(Cdh2)]mRNA表达水平.结果 与本组前一时间点比较,皮粘散组、水牛皮组和硼砂组给药第7、14、21天创面面积、皮肤溃疡主要症状积分均降低,给药第14、21天创面愈合率升高(P＜0.05).与模型组同时间点比较,皮粘散组给药第7、14、21天的创面面积及皮肤溃疡主要症状积分均明显降低、创面愈合率明显升高(P＜0.05).给药第21天,皮粘散组CD31、CollagenⅢ免疫荧光可见荧光信号强,且排列一致性较好;HE染色可见胶原纤维排列更加紧密,炎性细胞浸润显著减少,多量新生毛细血管形成;Wnt4、Ctnnb1、Ccnd1、Cdh2mRNA表达显著增加(P＜0.05).与皮粘散组同时间点比较,水牛皮组及硼砂组给药第7、14、21天创面面积均增大、创面愈合率降低(P＜0.05);硼砂组给药第7、14、21天溃疡色泽积分、溃疡肉芽组织积分均显著升高,给药第14、21天溃疡分泌物积分升高(P＜0.05).HE染色可见水牛皮组及硼砂组较皮粘散组炎性细胞浸润显著增加,且硼砂组较水牛皮组炎性细胞浸润更加严重.硼砂组CD31、Collagen Ⅲ荧光信号弱于水牛皮组;硼砂组Wnt4、Ctnnb1、Ccnd1、Cdh2 mRNA表达较皮粘散组降低(P＜0.05).结论 皮粘散对大鼠慢性皮肤溃疡创面有较好的治疗作用,且水牛皮与硼砂配伍具有协同作用,其作用机制可能与调节Wnt/β-catenin信号通路,从而上调创面组织中CD31、Collagen Ⅲ的表达有关.