秋葵花黄酮提取物通过JAK-STAT信号通路保护葡聚糖硫酸钠诱导的人正常结肠上皮细胞损伤

目的 探讨秋葵花黄酮提取物(AFE)对葡聚糖硫酸钠(dextran sulfate sodium,DSS)诱导的人正常结肠上皮细胞NCM460损伤的保护作用.方法 采用比色法测定AFE中总黄酮含量并利用UPLC-QE-Orbitrap-MS分析黄酮组分,采用比色法测定DPPH+和ABTS+自由基清除率以评估AFE抗氧化能力.采用不同浓度的AFE溶液(0.025、0.050和0.100 mg/ml)处理NCM460细胞12 h,再用75 mg/ml DSS溶液处理12 h.干预结束后,利用Hochest 33258染色和JC-1染色评估细胞凋亡情况,利用ELISA和Western blot检测细胞中IL-6水平,利用Western blot检测JAK-STAT信号通路相关蛋白表达水平.结果 AFE中总黄酮含量为62.57％±0.06％,黄酮成分多以黄酮糖苷形式存在,DPPH+和ABTS+自由基清除率IC50分别为(0.671±0.027)mg/ml和(0.052±0.007)mg/ml.体外细胞实验中,DSS促使NCM460凋亡,细胞内出现凋亡小体和皱缩态细胞核,细胞膜电位降低,AFE处理后凋亡小体减少,细胞膜电位恢复.同时,DSS处理后,细胞IL-6水平增高,JAK-STAT通路异常激活,AFE干预后IL-6水平降低(P＜0.05),并降低JAK水平和STAT3磷酸化水平(P＜0.05).结论 AFE是一种成分复杂的有效抗氧化剂,能通过抑制JAK-STAT通路,抵抗DSS引起的NCM460细胞损伤,在肠道疾病中有一定的应用潜力.