知母皂苷A Ⅲ通过JAK-2/STAT3/PD-L1信号通路增加A549/DDP对顺铂的敏感性

目的 探索知母皂苷AⅢ(timosaponin A Ⅲ,TA3)增加非小细胞肺癌顺铂耐药株A549/DDP细胞顺铂敏感性的作用机制.方法 选取A549/DDP细胞作为主要研究对象,利用CCK-8法检测TA3、顺铂以及两药联用对A549/DDP细胞增殖的影响;组别分为空白组、TA3组、顺铂组、TA3+顺铂组;应用细胞克隆形成检测联合用药对细胞增殖的影响;利用流式细胞检测术检测细胞凋亡率和周期分布;qRT-PCR和Western blot 检测 C-myc,cleaved-caspase-3,caspase-3 基因mRNA和蛋白的相对表达量.Western blot检测用药后对细胞中JAK-2/STAT3通路蛋白表达的影响.流式细胞术检测细胞PD-L1的表达.结果 CCK8、克隆形成结果表明TA3组明显增加顺铂对A549/DDP细胞的敏感性;与顺铂组单独使用组相比,TA3和顺铂联用明显增加A549/DDP细胞凋亡率(P＜0.05),诱导细胞周期阻滞在G0/G1期,同时抑制抗凋亡蛋白C-myc的mRNA和蛋白表达水平,促进凋亡蛋白caspase-3 的 mRNA 和蛋白表达水平(P＜0.05).Western blot实验结果表明两药联用可以明显下调p-JAK2和p-STAT3蛋白表达水平(P＜0.05).流式细胞术结果显示TA3与顺铂联用能够抑制顺铂诱导的PD-L1的表达.结论 TA3能增加A549/DDP对顺铂的敏感性,其机制可能与抑制JAK-2/STAT3信号通路和下调PD-L1的表达相关.