卡格列净通过抑制长链非编码RNA CO9缓解高糖环境下肾小管上皮细胞凋亡

目的:探讨高糖环境下卡格列净通过抑制lncRNA CO9缓解肾小管上皮细胞凋亡的作用及其机制。 方法:体外培养人近端肾小管上皮细胞系（HK-2），将其分为正常葡萄糖（NG）组、高渗（HO）组、高糖（HG）组、高糖+二甲基亚砜组（DMSO组）、高糖+卡格列净组（CANA组）、高糖+阴性对照小干扰RNA组（si-NC组）、高糖+lncRNA CO9小干扰RNA组（si-CO9组）、高糖+空载质粒组（PEX-NC组）、高糖+lncRNA CO9过表达质粒组（PEX-CO9组）、高糖+卡格列净+lncRNA CO9过表达质粒组（CANA+PEX-CO9组）。采用细胞计数试剂-8（CCK-8）法与四唑盐（MTT）比色法检测细胞增殖率；Western blotting检测凋亡相关蛋白［B细胞淋巴瘤 2相关X蛋白（Bax）、B细胞淋巴瘤 2（Bcl-2）、半胱氨酸蛋白酶-3（Caspase-3）、活化型Caspase-3］与核因子（NF）-κB p50亚基及其前体p105蛋白的相对表达量，计算Bax/Bcl2蛋白相对表达量比值；流式细胞术检测细胞凋亡率；实时荧光定量PCR（qRT-PCR）检测lncRNA CO9与 NF-κB1 mRNA的相对表达量。采用荧光原位杂交检测lncRNA CO9亚细胞定位，基因本体论（GO）、京都基因与基因组百科全书（KEGG）分析预测其功能。收集临床正常对照组（NC组，5例）与糖尿病肾脏病组患者（DKD组，5例）肾脏样本，检测其近端肾小管上皮细胞lncRNA CO9的表达。两组间比较采用独立样本 t检验，多组间比较采用单因素方差分析。 结果:与NG组相比，HG组细胞增殖率降低，Bax/Bcl2蛋白相对表达量比值、Caspase-3与活化型Caspase-3蛋白相对表达量、细胞凋亡率、lncRNA CO9均显著上调；而与HG组相比，CANA组细胞凋亡率下降，lncRNA CO9表达下调（ P<0.05）。lncRNA CO9定位于细胞质。GO与KEGG分析显示，lncRNA CO9与细胞凋亡通路相关。在DKD组肾脏组织近端肾小管上皮细胞lncRNA CO9表达较NC组上调（ P<0.05）。相较于HG组，si-CO9组凋亡蛋白相对表达量、凋亡率及 NF-κB1 mRNA、NF-κB p50亚基及其前体p105蛋白相对表达量下降，PEX-CO9组则增高（ P<0.05）。与CANA组相比，CANA+PEX-CO9组的凋亡蛋白相对表达量、凋亡率与 NF-κB1 mRNA、NF-κB p50亚基及其前体p105蛋白相对表达量上升（ P<0.05）。 结论:卡格列净可通过抑制lncRNA CO9的表达缓解高糖诱导的肾小管上皮细胞凋亡。