建立检测与鉴定布鲁氏菌A19疫苗株的巢式PCR方法

目的:建立检测与鉴定布鲁氏菌A19疫苗株基因组DNA的巢式PCR方法。方法:通过全基因组序列比较，分析布鲁氏菌A19疫苗株与其他布鲁氏菌全基因组序列的差异位点，依据差异位点设计引物，建立检测与鉴定布鲁氏菌A19疫苗株基因组DNA的巢式PCR方法。提取布鲁氏菌A19疫苗株基因组DNA，倍比稀释后作为模板DNA，应用建立的巢式PCR方法进行灵敏性测试；同时，应用建立的巢式PCR方法检测除布鲁氏菌A19疫苗株之外的其他布鲁氏菌及非布鲁氏菌菌株基因组DNA，进行特异性测试。结果:建立的巢式PCR方法检测布鲁氏菌A19疫苗株基因组DNA最低检出限为3.43 fg，扩增结果显示，出现246 bp电泳条带，其他布鲁氏菌菌株出现314 bp电泳条带，而非布鲁氏菌菌株均未扩增出电泳条带。结论:建立的巢式PCR方法具有灵敏性高、特异性强的特点，反应体系中存在1个拷贝数的布鲁氏菌A19疫苗株基因组DNA，即可检测到，本方法适用于标本中布鲁氏菌A19疫苗株微量基因组DNA的检测与鉴定。