槲皮素通过PTEN/PI3K/JNK信号通路减轻小鼠RAW264.7巨噬细胞炎症

目的:探讨槲皮素(quercetin,Que)对细菌脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的小鼠巨噬细胞炎症模型的抗炎效应及其与第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源蛋白(phosphatase and tensin homolog deleted on chromosome ten,PTEN)/磷脂酰肌醇3-激酶(phosphatidylinositol 3-kinase,PI3K)信号通路联合抗炎的效果和机制.方法:以小鼠巨噬细胞RAW264.7为研究对象.采用CCK-8实验确认0～100μmol/L Que的安全实验浓度.将细胞分为对照组、LPS炎症细胞模型组(LPS组)和不同浓度的Que处理LPS炎症细胞模型组(Que组).Griess法检测各组细胞内一氧化氮(nitric oxide,NO)的分泌;ELISA法检测各组细胞上清液中白细胞介素1β(interleukin-1β,IL-1β)、IL-6和肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)的表达;RT-qPCR、Western blot和免疫荧光法检测Que对各组细胞内PTEN/PI3K和c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinase,JNK)信号通路蛋白的调节作用;利用PI3K抑制剂LY294002及PTEN外源过表达质粒探索Que与PI3K/PTEN的联合抗炎作用.结果:(1)对比LPS组,Que呈浓度依赖性地降低RAW264.7细胞内NO的分泌(P<0.05);(2)Que能显著降低LPS引起的iNOS、IL-1β、IL-6及TNF-α的mRNA表达(P<0.05);(3)与LPS组相比,Que组PTEN蛋白表达显著升高(P<0.05),p-PI3K和p-AKT及p-JNK的蛋白水平显著下降(P<0.05);(4)LY294002的作用证实Que在RAW264.7细胞内抑制炎症反应与调控PI3K信号通路有关;(5)PTEN过表达实验证实PTEN可增强Que在RAW264.7细胞内的抗炎作用.结论:(1)Que在体外培养的小鼠RAW264.7细胞内具有抗炎活性,其机制与活化PTEN的表达、阻断PI3K/AKT及JNK信号通路有关.(2)PTEN可增强Que在RAW264.7细胞内的抗炎能力.