mTORC1/2双重抑制剂OSI-027抑制高氧诱导的肺成纤维细胞增殖和分化

目的:分析哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)复合物1/2(mTOR complex 1/2,mTORC1/2)双重抑制剂OSI-027对高体积分数氧(高氧)所致人胚肺成纤维细胞增殖和分化的抑制作用.方法:高氧(95％O2)处理人胚肺成纤维细胞MRC-5建立增殖分化模型,分为对照组、高氧组、高氧+OSI-027组和高氧+雷帕霉素组.Western blot检测α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)、I型胶原蛋白(collagen type I,Col I)、增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)、细胞周期蛋白D1(cyclin D1)、RhoA、Rho相关含卷曲螺旋蛋白激酶1(Rho-associated coiled-coil-containing protein kinase 1,ROCK1)、蛋白激酶B(protein kinase B,PKB/AKT)、p-AKT和mTOR的表达;CCK-8实验检测细胞活力;流式细胞术检测细胞周期.结果:与对照组相比,PCNA、cyclin D1、Col I和α-SMA表达随高氧处理时间增加而增加(P<0.05).与高氧组相比,OSI-027及雷帕霉素干预后,细胞活力下降,细胞周期被抑制在G1期(P<0.05).高氧+OSI-027组PCNA、cyclin D1、Col I及α-SMA蛋白表达明显低于高氧组和高氧+雷帕霉素组(P<0.05).高氧组mTOR信号通路蛋白RhoA、ROCK1、AKT、p-AKT和mTOR表达显著增高(P<0.05),但经OSI-027处理后均显著下降(P<0.05).结论:高氧可促进MRC-5细胞以时间依赖的方式增殖和分化,同时伴有mTOR信号通路活化.OSI-027可通过抑制mTOR通路抑制高氧处理后MRC-5细胞的增殖和分化,有望为临床干预高氧肺纤维化提供新的靶点.