布鲁氏菌Ⅳ型分泌系统效应蛋白VceC对山羊滋养层细胞内质网应激和性腺激素分泌的影响

旨在研究布鲁氏菌Ⅳ型分泌系统效应分子VceC对山羊滋养层细胞(GTC)内质网应激及性腺激素分泌的影响,为揭示其在布鲁氏菌感染宿主细胞中的作用,阐明布鲁氏菌胞内生存和引起动物流产的机制提供重要依据.本研究通过构建VceC的真核表达载体pEGFP-C1-VceC并转染GTC,Western blot检测内质网应激标志性分子GRP78和CHOP蛋白表达量变化,qRT-PCR和Western blot进一步检测未折叠蛋白反应(UPR)信号通路相关分子;ELISA检测细胞培养上清液的孕酮和雌激素的浓度变化.结果表明,成功构建了 VceC真核表达载体pEG-FP-C1-VceC,转染GTC后,12和24 h GRP78蛋白表达均显著升高(P＜0.01),24 h后CHOP蛋白表达显著降低(P＜0.05);qRT-PCR 检测 IRE1 和 XBP-1 的 mRNA 表达量在 24 h 均显著升高(P＜0.05),而 PERK、ATF6 和ATF4 mRNA的表达未发生显著变化(P＞0.05),Western blot检测IRE1蛋白的表达在转染12 h后显著升高(P＜0.01);VceC转染组细胞培养上清液中孕酮含量在转染12和24 h后显著低于空白组和空载体组(P＜0.01),雌激素无显著差异(P＞0.05).证明布鲁氏菌VceC不仅能通过激活UPR中的IRE1通路从而激发GTC的内质网应激反应,还能改变GTC中孕酮/雌激素的比值.