二维高效液相色谱法同时测定菜肴中维生素A、D和E

目的 建立二维高效液相色谱法同时测定菜肴中维生素A、D、E的方法.方法 试样在抗氧化剂保护下,经过皂化,乙酸乙酯-正己烷混合液(3∶ 2,V/V)提取,二维高效液相色谱仪测定.以华谱Alphasil五氟苯基柱(150 mm×4.6 mm,5 μm)为一维色谱柱,用水和甲醇为流动相进行梯度洗脱,实现视黄醇、α-生育酚、β-生育酚、γ-生育酚、δ-生育酚、α-生育三烯酚的基线分离,荧光检测器检测;以华谱Alphasil VC-C18柱(4.6 mm×150 mm,3.5μm)为二维色谱柱,用含2％甲醇的乙腈溶液为流动相进行梯度洗脱,实现维生素D2、D3与其他杂质的分离,紫外检测器检测.结果 本研究实现视黄醇、维生素D2和维生素D3、5种生育酚的基线分离检测,在预设的浓度范围内各目标化合物呈线性相关,相关系数＞0.999;样品中三水平加标回收率为85.4％～106.4％,相对标准偏差＜8％.对干炸带鱼、油焖香菇、酱油蒸蛋、红烧肉、糖醋排骨等常见成品菜肴进行6次重复测定,相对标准偏差均小于10％.视黄醇的检出限为0.7 μg/100 g,定量限为2.4 μg/100 g,5种生育酚的检出限为1.1～2.5 μg/100g,定量限为 3.6～8.3 μg/100 g;维生素 D2、D3 的检出限为 0.3 μg/100g,定量限为1.0μg/100g.应用本方法检测了 41份成品菜肴中维生素A、D、E含量,发现在动物源性菜肴中可检出维生素A和D3,在所有菜肴中均可检出α-生育酚和γ-生育酚,在使用了植物油的菜肴中可检出5种生育酚.带鱼采用清蒸、红烧、干炸3种不同的烹饪方式,维生素A和D3的含量依次降低.结论 本方法具有操作简单、重复性好、准确性高,对操作人员和生态环境友好等特点,可实现成品菜肴中维生素A、D、E的同时分型检测.