甲基转移酶3调控pri-miR-21甲基化修饰在糖尿病肾病肾脏纤维化中的作用

目的·探讨甲基转移酶3(methyltransferase like 3,METTL3)调控pri-miR-21 的N6-甲基腺苷(N6-methyladenosine,m6A)甲基化修饰在糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)小鼠肾脏纤维化发病机制中的作用.方法·采用8周龄雄性db/db小鼠作为DN模型小鼠,db/m小鼠作为对照,同时按照是否经尾静脉注射S-腺苷高半胱氨酸水解酶抑制剂3-脱氮腺苷(3-deazaadenosine,DAA),共随机分为 4 组(5 只/组),分别为 db/m组、db/db组、db/m+DAA组和db/db+DAA组;8 周龄开始注射DAA,注射1次/5d,共注射8次.DAA干预结束后继续饲养小鼠至19周龄,收取各组小鼠血、尿、肾脏组织标本.检测血糖、血肌酐、尿白蛋白肌酐比(albumin-to-creatinine ratio,ACR),肾脏行苏木精-伊红(H-E)染色、Masson染色及天狼星红染色观察病理变化;试剂盒检测肾脏总RNA中m6A的甲基化水平;Western blotting检测肾脏METTL3及纤维化相关蛋白表达;实时定量PCR检测肾脏总pri-miR-21和成熟miR-21;使用免疫磁珠富集肾脏组织中m6A甲基化RNA,并通过PCR检测其中m6A甲基化的pri-miR-21.结果·相较于db/m组,db/db组小鼠血糖,血肌酐,ACR,肾脏METTL3、m6A甲基化修饰水平、纤维化相关蛋白、总pri-miR-21、m6A甲基化pri-miR-21和成熟miR-21表达水平均显著增加(均P＜0.05),小鼠肾脏系膜基质增多、肾小球基底膜增厚、胶原纤维累积显著增加.相较于db/db组,db/db+DAA组血糖,血肌酐,ACR,肾脏m6A甲基化修饰水平、纤维化相关蛋白、m6A甲基化pri-miR-21和成熟miR-21表达水平均显著下降(均P＜0.05),总pri-miR-21表达水平显著升高(P=0.000),METTL3蛋白表达水平未见显著变化,小鼠肾脏损伤及纤维化程度显著减轻.结论·pri-miR-21的m6A甲基化修饰促进miR-21成熟,进而促进DN小鼠肾脏纤维化的发生发展;抑制METTL3可通过调控pri-miR-21的m6A甲基化修饰抑制DN小鼠肾脏纤维化.