镁对猪主动脉瓣间质细胞成骨分化的作用及其机制

目的 探究镁对猪主动脉瓣间质细胞(aortic valve interstitial cells,AVICs)成骨分化的调节作用及其潜在机制.方法 采用II型胶原酶两步消化法分离培养AVICs,采用免疫荧光染色以及流式细胞术进行表型鉴定.将细胞分为空白对照组(Blank组)、成骨诱导培养基组(OIM组)和镁处理组(浓度为1、2、3 mmol/L MgSO4溶液),分别处理7 d.采用Western blot检测各组细胞中成骨分化标志物骨桥蛋白(osteopontin,OPN)、RUNT相关转录因子2(RUNX2)表达量的变化;茜素红染色检测各组细胞中钙盐沉积情况;Western blot检测镁对PI3K/AKT和MAPK/ERK1/2信号通路的作用情况.结果 AVICs高表达波形蛋白(Vimentin),低表达α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA),不表达CD31,AVICs纯度理想.Western blot结果提示与Blank组相比,OIM组的成骨标志物OPN、RUNX2表达量显著增加(P＜0.01);与OIM组相比,3 mmol/L镁处理组可显著降低体外OIM诱导AVICs的OPN和RUNX2表达水平(P＜0.01).茜素红染色可见与Blank组相比,OIM组钙盐沉积明显增加;与OIM组相比,镁处理组能抑制体外OIM诱导的钙盐沉积.Western blot结果提示镁能够显著降低OIM诱导的PI3K/AKT和MAPK/ERK1/2的磷酸化水平(P＜0.01).结论 镁可能通过调节PI3K/AKT和MAPK/ERK1/2信号通路,在一定程度上抑制体外OIM诱导AVICs成骨分化的发生.