基于Cre-LoxP系统构建一种新的时间特异性突变NLRP3转基因小鼠模型

目的 应用Cre-LoxP系统构建一种新的时间特异性NLRP3点突变转基因小鼠模型并对其进行鉴定.方法 利用Cre-LoxP技术,构建NLRP3基因T346M点突变的flox杂合子(NLRP3 flox/+)小鼠.将该小鼠与广谱表达Cre重组酶工具鼠(CAG-Cre/ERT2,CreT)杂交繁育,获得基因型NL-RP3 flox/+CreT+/-小鼠,后者与NLRP3 T346M的flox纯合子(NL-RP3 flox/flox)小鼠进一步交配获得NLRP3 flox/flox CreT+/-(KI/KI)和NLRP3 flox/+CreT+/-(KI/WT)小鼠,于6～8周时经他莫昔芬的诱导实现NLRP3 T346M突变基因的时间特异性敲入.小鼠繁育和鉴定过程中,用PCR方法检测鼠尾基因组DNA.采用Western blot法检测小鼠肝脏和心脏中NLRP3、pro-Caspase-1和Caspase-1的蛋白质表达水平.结果 小鼠给予他莫昔芬后,NLRP3 T346M突变基因被诱导敲入.Western blot结果显示,KI/KI小鼠肝脏和心脏组织以及KI/WT小鼠心脏中NLRP3炎性小体效应蛋白Caspase-1的表达水平较同窝野生型小鼠显著上调.结论 本研究基于Cre-LoxP技术成功构建了NLRP3 T346M突变转基因小鼠模型,该模型小鼠在他莫昔芬诱导后可出现自发性的NLRP3炎症小体活化,这为探究NLRP3炎症小体活化机制以及筛选和评价NLRP3炎症小体抑制剂提供了新的时间特异性的实验动物模型.