肝细胞核因子4α抑制胃癌中自噬的作用及其机制

目的 探讨肝细胞核因子4α(HNF4A)对胃癌(GC)细胞自噬的调控作用及机制.方法 人GC细胞株AGS(CRL-1739)、HGC-27(CL-0107)购自美国典型培养物保藏中心,GC细胞株分为空载体对照组、HNF4A过表达组、随机干扰组、HNF4A干扰组,筛选稳定过表达/敲低HNF4A的亚克隆细胞株;采用实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)、蛋白质印迹法(Western blot)检测GC细胞中HNF4A的转录水平和蛋白表达变化;通过JASPAR分析寻找胃癌中HNF4A潜在靶基因;荧光成像检测细胞自噬通量变化;软琼脂克隆形成和基质胶侵袭检测细胞增殖及侵袭能力,组间比较采用t检验.结果 稳定过表达/敲低HNF4A的亚克隆细胞株,HNF4A组表达指标高于空载对照组(3.56±0.03 比 1.00±0.04,t=25.62,P＜0.05),敲低 HNF4A 组表达指标低于随机干扰组(0.27±0.04 比 1.00±0.03,t=21.53,P＜0.05).HNF4A 过表达组自噬相关蛋白 5(ATG5,2.54±0.11 比1.00±0.03,t=41.70,P＜0.05)和自噬相关蛋白 12(ATG12,3.14±0.03 比 1.00±0.02,t=24.72,P＜0.05)表达指标,克隆形成数指标(386.00±14.42比144.00±11.14,t=23.00,P＜0.05)和侵袭细胞数指标(391.70±9.50比144±11.14,t=29.30,P＜0.05)均高于空载对照组;相反,HNF4A干扰组 ATG5(0.28±0.05 比 1.00±0.02,t=20.32,P＜0.05)和ATG12(0.31±0.07 比 1.00±0.05,t=18.93,P＜0.05)表达指标,克隆形成数指标(50.00±5.57 比 136.00±10.15,t=12.87,P＜0.05)和侵袭细胞数指标(45.00±11.00比150.30±13.58,t=10.44,P＜0.05)均低于随机干扰组.结论 转录因子HNF4A调控自噬相关基因ATG5和ATG12表达,促进胃癌细胞自噬.