微小RNA-33b-5p靶向ETS1在胰腺癌吉西他滨耐药中的作用

目的 探讨微小RNA-33b-5p(miR-33b-5p)靶向E26转录因子-1(E26 transformation specific-1,ETS1)在胰腺导管腺癌(PDAC)吉西他滨耐药中的作用.方法 通过实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)和蛋白质印迹法(Western blot)检测胰腺癌细胞ASPC-1和胰腺癌耐药细胞ASPC-1/GEM中miR-33b-5p和ETS1的表达水平,双荧光素酶报告实验验证miR-33b-5p与ETS1之间的靶向关系;免疫组织化学染色检测PDAC患者敏感组与抵抗组ETS1的表达;转染ASPC-1/GEM细胞,分为 NC mimic 组、miR-33b-5p mimic 组、ETS1 小干扰 RNA(siRNA)NC 组及 ETS1 siRNA 组,RT-qPCR检测转染后miR-33b-5p,ETS1 mRNA的表达水平,Western blot检测ETS1的表达水平,细胞计数试剂盒(CCK-8)检测细胞活性并计算吉西他滨半数抑制浓度(IC50),流式细胞术检测细胞凋亡水平.结果 与ASPC-1细胞比较,ASPC-1/GEM细胞株中miR-33b-5p表达下降(t=-11.011,P＜0.05)、ETS1表达升高(P＜0.05);双荧光素酶报告实验表明miR-33b-5p可明显降低野生型ETS1-33b-5p-WT载体荧光素酶活性(t=-4.453,P＜0.05);免疫组织化学结果显示ETS1在抵抗组中表达量明显高于敏感组(8.11±2.80比2.78±0.83,P＜0.05);miR-33b-5p mimic组IC5n明显低于 NC mimic 组[(25.10±1.77)μmol/L 比(43.63±3.04)μmol/L,t=-9.110,P＜0.05],miR-33b-5p表达量明显高于NC mimic组(t=19.444,P＜0.05),ETS1的表达量明显低于NC mimic组(P＜0.05),凋亡率明显高于 NC mimic 组[(18.8±1.9)％比(5.3±0.4)％,t=12.239,P＜0.05];ETS1 siRNA 组吉西他滨 IC50 明显低于 ETS1 siRNA NC 组[(20.39±0.89)μmol/L 比(37.38±2.62)μmol/L,t=-10.628,P＜0.05].结论 miR-33b-5p 可能通过抑制 ETS1 表达促进 PDAC 对吉西他滨化疗的敏感性.