梨花药愈伤组织诱导和悬浮培养体系的建立及应用

[目的]建立梨悬浮细胞体系,并利用悬浮细胞体系获得高质量悬浮细胞,进行遗传转化和原生质体的分离.[方法]以新梨7号花药为试材,诱导获得梨花药愈伤组织,研究了细胞悬浮系建立和影响悬浮细胞增殖的主要因子.[结果]花药在1/2 MS+1.0 mg·L-12,4-D+0.4 mg·L-1 NAA+30 g·L-1蔗糖+7 g·L-1琼脂(pH值为5.8～6.0)培养基上诱导的愈伤组织,经4～5次继代得到了黄白色、颗粒状,状态相对较好的愈伤组织;将愈伤组织接种于液体培养基中,于28℃,200 r·min-1的黑暗条件下悬浮振荡培养,经4～5次悬浮继代培养建立了悬浮细胞系,适宜的启动和增殖培养基为:MS+1.5 mg·L-12,4-D+1.0 mg·L-16-BA+30 g·L-1蔗糖,细胞生长曲线呈"S"型,活细胞率达81.98％,近圆细胞率达83.66％,可作为遗传转化的受体,转化率为20.00％.也可直接用于原生质体的分离,原生质体产量达3.67×106 个·mL-1,活力可达92.00％.[结论]建立了梨悬浮细胞培养体系,利用所建体系获得了高质量的悬浮细胞,可直接用于遗传转化和原生质体的分离.