造血器官坏死病病毒M蛋白的可溶性表达及免疫原性分析
wf（2023）
摘要
为在大肠杆菌中高效表达出可溶性的传染性造血器官坏死病病毒(IHNV)基质蛋白M,并分析其免疫原性,构建了 pMAL-c2x-m原核表达质粒,优化表达条件并纯化MBP-M融合蛋白;对蛋白进行Western blot和DDA鉴定;将鉴定后的蛋白免疫BALB/c小鼠,利用Western blot鉴定鼠抗MBP-M血清,通过间接ELISA检测该血清效价.结果显示:在大肠杆菌中获得了可溶性的MBP-M蛋白,其相对分子质量约为64 kDa,与预期结果致;MBP-M蛋白在IPTG为0.5 mmol/L,25℃诱导12 h时上清表达量较高;经Western blot鉴定,MBP-M蛋白可与鼠抗血清发生特异性反应,而不与阴性对照血清发生反应;ELISA检测血清效价达1∶25 600.结果表明,本研究获得的MBP-M蛋白具有较好的免疫原性,这为IHNV基因工程疫苗研发奠定了基础.
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