真核表达猪白细胞介素17及其生物活性研究

目的：为真核表达猪白细胞介素17(IL-17)，研究产物在细胞培养下的免疫生物活性。方法：通过PCR扩增出猪IL-17基因并插入到真核表达载体pVAV1，然后转染到IPEC-J2细胞、HaCaT细胞和L02细胞中。在转染后第24、48和72h收集细胞，第48h收集上清液。收集细胞通过实时荧光定量PCR检测相关免疫基因的表达水平，收集上清液通过抑菌试验检测相关抗菌肽的生物活性。结果：采用pVAX1载体构建了表达猪IL-17的重组质粒，转染到细胞中。证实IL-17基因能诱导抗菌肽基因（RegⅢ、S100A8和BD2）的表达，显著上调JAK-STAT信号通路基因（JAK1、STAT1和STAT3）和细胞因子基因（IL-6、IL-12和TNF-α）的表达。此外，细胞上清液能够在不同程度上抑制大肠杆菌及金黄色葡萄球菌的增殖。结论：成功将猪IL-17基因真核表达，其表达产物能诱导效应细胞表达多种细胞因子，产生多种抗菌肽，具有抑菌能力；这为进一步研发猪IL-17作为抗菌免疫分子制剂奠定了初步基础。