宽体金线蛭抗凝血活性肽的分离纯化及肽序列研究

目的 研究宽体金线蛭抗凝血活性肽的分离纯化及其序列分析.方法 以Fibg-TT法为评价指标,采用超滤、纳滤、阳离子交换树脂和反相液相色谱法分离纯化,得到具有抗凝活性的多肽,采用纳升液相色谱-四级杆-超高分辨轨道阱质谱法测定氨基酸序列,并对其进行全面鉴定与表征.结果 最终得到4条具有抗凝活性的多肽,氨基酸序列分别为:亮氨酸-苏氨酸-谷氨酸-丙氨酸-脯氨酸-亮氨酸-天冬酰胺-脯氨酸-赖氨酸(LTEAPLNPK);甘氨酸-苯丙氨酸-丙氨酸-甘氨酸-天冬氨酸-天冬氨酸-丙氨酸-脯氨酸-精氨酸-丙氨酸(GFAGDDAPRA);异亮氨酸-异亮氨酸-脯氨酸-丝氨酸-丝氨酸-苏氨酸-甘氨酸-丙氨酸-丙氨酸-赖氨酸(IIPSSTGAAK);亮氨酸-甘氨酸-缬氨酸-谷氨酸-甘氨酸-脯氨酸-丝氨酸-赖氨酸-丙氨酸(LGVEGPSKA).4条活性肽均由9～10个氨基酸构成,且分子量皆小于1000 Da,属于抗凝活性小肽的范畴.结论 研究结合多种分离纯化手段和nano LC-Q-Exactive-MS/MS多肽分析技术实现了宽体金线蛭蛋白质多肽类物质的快速分离和准确分析,为进一步了解宽体金线蛭的质量控制提供关键信息.