TGFβRI、TGFβRII、FSH和TGFβ1对猪颗粒细胞增殖凋亡的影响

为研究TGF-β通路对猪颗粒细胞增殖、凋亡的影响,本研究对TGF-β通路基因进行调控处理,设计并筛选可高效干扰TGFβRI及TGFβRII表达的载体,转染不同干扰载体及添加10 ng/mL TGFβ1和25 ng/mL FSH,采用Western blot、MTT和流式细胞法检测不同处理对颗粒细胞TGFβRI和TGFβRII蛋白表达量和细胞增殖凋亡的影响.结果表明:成功筛选出干扰效率最高的pOSP1-TGFβRI-sh5和pOSP1-TGFβRII-sh3载体,对TGFβRI和TGFβRII的抑制率分别为78.00％和84.10％;转染后TGFβRI干扰组的TGFβRI蛋白表达量显著低于其阴性对照组;TGFβRII干扰组、TGFβ1组和FSH组的TGFβRII蛋白表达量显著低于其阴性对照组;TGFβRI干扰组、TGFβRII干扰组的增殖抑制率极显著高于PLL3.7空载体组,TGFβ1组细胞增殖抑制率极显著高于空白对照组且FSH组的增殖抑制率显著高于空白对照组;TGFβRI干扰组和TGFβRII干扰组细胞凋亡率极显著高于PLL3.7空载体组;TGFβ1组和FSH组细胞凋亡率极显著高于空白对照组.总之,RNAi介导的TGFβRI和TGFβRII沉默和外源因子(10 ng/mL TGFβ1和25 ng/mL FSH)引起的TGFβRII蛋白下调,均会减弱TGF-β信号传导通路对卵泡颗粒细胞的促进作用,进而抑制卵泡颗粒细胞的增殖,促进其凋亡.