猪囊胚体外持续发育培养体系主要影响因素的研究

本研究旨在探索猪囊胚体外持续发育的关键影响因素,为构建支持猪胚胎体外发育至三胚层分化阶段的培养体系奠定基础.采用孤雌激活后6 d的猪囊胚进行体外持续培养,通过检测分析发育至8 d的猪孤雌囊胚的形态学特征和基因表达情况,系统评价PZM-3、Advanced DMEM/F12和KnockOutTM DMEM/F12基础培养体系,以及胎牛血清(Fetal Bovine Serum,FBS)、血清替代物(Knockout Serum Replacement,KSR)、L-谷氨酰胺(L-Glutamine)和胰岛素-转铁蛋白-硒-氨基乙醇(Insulin-Transferrin-Selenium-X,ITS-X)等成份对猪囊胚体外持续发育的作用,建立猪囊胚体外持续发育培养体系;通过TUNEL和免疫荧光方法检测该体系对猪囊胚的影响.结果表明:AKGI(Advanced DMEM/F12组合添加5％KSR、4 mmol/L L-Glutamine和1×ITS-X)为猪囊胚体外持续发育最适培养体系,可增加囊胚直径和囊胚细胞数(P<0.05),降低凋亡细胞比例(P<0.01),增加内细胞团(Inner Cell Mass,ICM)细胞数(P<0.05),促使NANOG在猪囊胚ICM中特异性表达.结果证明,AKGI培养体系是猪囊胚体外持续发育最佳体系,支持猪囊胚在体外发育至8 d,为建立猪孵化后胚胎体外持续发育培养体系奠定了基础.