基于巨噬细胞焦亡探讨心脉康方抗动脉粥样硬化机制

[目的]探讨心脉康方(由鳖甲、三棱、莪术、牡蛎、地龙、枳实、胆南星、党参等组成)对动脉粥样硬化的防治作用及机制.[方法]J774A.1巨噬细胞实验分为对照组(10％胎牛血清),氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)组[100μg·mL-1 ox-LDL],阿托伐他汀组(100μg·mL-1 ox-LDL+10％阿托伐他汀含药血清),心脉康方低、中、高浓度组(100μg·mL-1 ox-LDL+相应5％、10％、20％的心脉康方含药血清),阿托伐他汀+Toll样受体4(TLR4)组(100μg·mL-1 ox-LDL+10％阿托伐他汀含药血清+2μg·mL-1 TLR4过表达质粒),心脉康方+TLR4组(100μg·mL-1 ox-LDL+20％的心脉康方含药血清+2μg·mL-1 TLR4过表达质粒),各组细胞加药处理48 h后进行后续实验.采用油红O染色法观察巨噬细胞泡沫化,采用生化法检测细胞中总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、游离胆固醇(FC)以及胆固醇酯(CE)水平,采用实时定量多聚酶链反应(qPCR)检测细胞中白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素18(IL-18)、TLR4、核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)、含CARD结构域的凋亡相关颗粒样蛋白(ASC)和半胱氨酸蛋白水解酶1(Caspase-1)mRNA表达水平,采用Western Blot法检测细胞中IL-1β、IL-18、消皮素D-N端(GSDMD-N)、TLR4、NLRP3、ASC和Caspase-1蛋白水平,采用碘化丙啶(PI)染色法观察细胞焦亡情况,采用微量酶标法检测细胞上清乳酸脱氢酶(LDH)含量.[结果]心脉康方含药血清能够抑制ox-LDL诱导巨噬细胞脂质累积、泡沫化、焦亡和炎症反应,并呈一定浓度依赖性;心脉康方含药血清能够抑制ox-LDL诱导的TLR4/NLRP3信号通路的激活;TLR4过表达能够逆转心脉康方含药血清对ox-LDL诱导的巨噬细胞脂质积聚、泡沫化、焦亡和炎症反应的抑制作用.[结论]心脉康方可能通过下调TLR4/NLRP3信号通路,抑制ox-LDL诱导的巨噬细胞焦亡,从而改善动脉粥样硬化.