ACACB基因DNA甲基化/过表达的肝癌细胞株MHCC97H增殖侵袭迁移能力变化观察

目的 观察抑制乙酰辅酶A羧化酶(ACACB)基因DNA甲基化/感染ACACB基因过表达慢病毒dCAS9-VP64的肝癌细胞株MHCC97H增殖侵袭迁移能力变化情况.方法 采用荧光定量PCR法检测肝癌细胞株SMMC7721、Hep3B、MHCC97H、MHCC97L及正常肝细胞株LO2中ACACB mRNA,采用焦磷酸测序实验测算SMMC7721、Hep3B、MHCC97H、MHCC97L、LO2细胞中ACACB基因cg06131338位点甲基化率.选取甲基化率相对较高的肝癌细胞株分为5-Aza-CdR组和对照组、ACACB过表达组和阴性表达组,5-Aza-CdR组加入DNA甲基转移酶抑制剂5-Aza-CdR,对照组加入二甲基亚砜,ACACB过表达组感染ACACB过表达慢病毒dCAS9-VP64,阴性表达组感染阴性对照慢病毒.采用焦磷酸测序实验测算5-Aza-CdR组和对照组细胞中ACACB基因cg06131338位点甲基化率,采用荧光定量PCR法检测4组细胞中ACACB mRNA,采用CCK8法观察各组细胞增殖能力(以OD值表示),采用侵袭小室观察各组细胞侵袭能力(以侵袭细胞数表示),采用迁移小室观察各组细胞迁移能力(以迁移细胞数表示).结果 肝癌细胞株SMMC7721、Hep3B、MHCC97H、MHCC97L中,ACACB mRNA的相对表达量均低于正常肝细胞株LO2(P均<0.01),ACACB基因cg06131338位点甲基化率均高于正常肝细胞株LO2(P均<0.01).5-Aza-CdR组细胞中ACACB基因cg06131338位点甲基化率低于对照组(P<0.01),ACACB mRNA相对表达量高于对照组(P<0.01).ACACB过表达组细胞中ACACB mRNA的相对表达量高于阴性对照组(P<0.01).5-Aza-CdR组细胞增殖、侵袭和迁移能力均低于对照组(P均<0.01),ACACB过表达组细胞增殖、侵袭和迁移能力均低于阴性对照组(P均<0.01).结论 在肝癌细胞株SMMC7721、Hep3B、MHCC97H、MHCC97L中,ACACB mRNA表达降低、ACACB基因cg06131338位点甲基化率升高,抑制cg06131338位点的甲基化可促进ACACB mRNA表达.抑制cg06131338位点的甲基化或过表达ACACB均可降低MHCC97H细胞增殖、侵袭和迁移能力.