杆状病毒凋亡抑制基因IAP1促进家蚕CyclinB的核内积累

[目的]家蚕核型多角体病毒(Bombyx mori nucleopolyhedrovirus,BmNPV)是生产上危害最严重的病原之一.BmNPV感染BmN-SWU1细胞将细胞周期阻滞于G2/M期.CyclinB是调控细胞周期G2期向M期转换的重要细胞周期蛋白.因此,研究BmNPV感染后CyclinB变化对解析病毒调控细胞周期的机制具有重要意义,同时探究这个过程中与CyclinB互作的病毒蛋白,可为构建家蚕转基因品系提供分子靶标.[方法]qRT-PCR检测BmNPV感染后BmCyclinB的表达变化;免疫荧光观察病毒感染前后BmCyclinB的定位变化,通过细胞质细胞核蛋白分离实验验证.免疫共沉淀钓取与BmCyclinB互作的病毒蛋白.BmNPV感染期间敲除BmNPV IAP1观察BmCyclinB的入核比例.[结果]BmNPV感染后BmCyclinB转录水平下调.BmNPV感染前BmCyclinB主要定位于细胞质,而感染后主要定位于细胞核.BmNPV感染BmN-SWUl细胞后促进BmCyclinB在核内积累.共钓取了 7个与BmCyclinB互作的病毒蛋白,免疫共沉淀和细胞共定位证明BmNPV IAP1与BmCyclinB之间存在相互作用.敲除BmNPV IAP1后BmCyclinB进入细胞核的数量显著减少.[结论]BmNPV IAP1可通过与BmCyclinB互作,促进BmCyclinB在核内积累.