基于肿瘤细胞膜受体干预的青藤碱抗肝癌作用机制研究

目的:以人肝癌HepG2细胞为研究对象,探讨青藤碱诱导人肝癌HepG2细胞凋亡的作用机制.方法:采用CCK-8法检测青藤碱对人肝癌HepG2细胞的增殖抑制作用;采用倒置显微镜、荧光显微镜观察人肝癌HepG2细胞形态变化;采用流式细胞仪检测人肝癌HepG2细胞的凋亡率;采用试剂盒检测肿瘤细胞膜总蛋白、胆固醇、唾液酸含量;采用荧光染色法检测肿瘤细胞膜微黏度、流动性、封闭度;采用ATP酶试剂盒检测肿瘤细胞膜Na+-K+ATP酶和Ca2+-Mg2+ATP酶含量;采用流式细胞仪检测线粒体MPTP转换孔活性、线粒体跨膜电位变化;采用试剂盒检测Caspase-3蛋白水平.结果:通过CCK-8法检测发现青藤碱对人肝癌HepG2细胞具有增殖抑制作用,作用72 h的IC50 为1.4 mmol/L.倒置显微镜、荧光显微镜观察细胞形态发现青藤碱各组细胞出现凋亡迹象.采用试剂盒检测肿瘤细胞膜主要组成成分、结构变化情况发现,青藤碱能降低人肝癌HepG2细胞膜总蛋白、胆固醇、唾液酸含量,并且能使肿瘤细胞膜微黏度显著升高,流动性、封闭度显著降低;检测青藤碱对人肝癌HepG2 细胞膜ATP酶含量影响发现,青藤碱能显著降低人肝癌HepG2细胞Na+-K+ATP酶和Ca2+-Mg2+ATP酶含量,且其作用呈浓度依赖性;检测青藤碱对人肝癌HepG2细胞线粒体膜MPTP转换孔、线粒体膜电位的影响发现青藤碱能使人肝癌HepG2细胞线粒体膜MPTP转换孔通透性增加,同时能升高肿瘤细胞内Caspase-3蛋白表达,且其作用呈浓度依赖性.结论:青藤碱对人肝癌HepG2细胞具有增殖抑制作用,并能通过干扰肿瘤细胞膜受体,破坏肿瘤细胞膜组成结构功能,激活肿瘤细胞凋亡的相关因子,进而启动细胞凋亡程序.