重组H5N1亚型流感病毒铁蛋白纳米粒mRNA疫苗的构建、表达及鉴定

目的 设计抗H5N1亚型流感病毒的通用型mRNA疫苗,并完成候选疫苗的构建、表达及鉴定.方法 设计3组候选疫苗抗原基因,分别命名为Flu、Flu-ferritin和CD5-Flu-ferritin(Flu含H1/H3/H5/B型流感病毒血凝素颈部区保守表位,并串联甲型流感病毒M2e基因中保守序列;Flu-Ferrin在Flu后串联铁蛋白,用以形成多聚体;CD5为分泌型信号肽,将多聚体外泌).3组基因依次克隆至设计的mRNA疫苗骨架载体上,通过质粒鉴定、线性化处理、体外转录、纯化、及Cap 1加帽处理,分别制备mRNA并转染A549细胞,通过Western blot和IFA方法鉴定目的蛋白的表达.结果 成功构建3组mRNA候选疫苗,并在A549细胞上表达抗原蛋白.结论 证明了抗原设计的可行性,为开展动物试验奠定了基础.