miR-3188对胃癌细胞恶性生物学行为的作用及机制研究

目的 探究miR-3188对胃癌细胞增殖、凋亡、侵袭及迁移的影响及其潜在分子机制.方法 通过qRT-PCR法检测正常人胃黏膜细胞(GES-1)及人胃癌细胞系(HGC-27、MGC-803、BGC-823、MKN-45)中miR-3188表达水平,通过生物信息学分析及双荧光素酶报告实验确定NRAGE是否为miR-3188的靶基因,分别将miR-3188 mimic、miR-3188 inhib-itor及阴性对照物miR-NC,antimiR-NC转染至胃癌细胞HGC-27中,通过Western blot及qRT-PCR法检测NRAGE蛋白及mRNA表达水平,将miR-3188 mimic,NRAGE过表达质粒(pc-NRAGE)及其阴性对照物miR-NC、pc-control分别或共转染至胃癌细胞HGC-27中,利用CCK-8、流式细胞术、Tr-answell实验检测各组细胞增殖活性、凋亡率、侵袭及迁移的能力,通过Western blot检测各组细胞上皮-间质转化(EMT)、增殖、凋亡、侵袭及迁移相关蛋白[细胞周期蛋白D 1(CyclinD 1),基质金属蛋白酶9(MMP 9),B-cell leuke-2蛋白(Bcl-2),N钙黏蛋白(N-cadherin),波形蛋白(Vimentin),E钙黏蛋白(E-cadherin)]的表达水平.结果 人胃癌细胞系中miR-3188表达水平低于人正常胃黏膜细胞,生物信息学分析及双荧光素酶报告实验证实miR-3188可与NRAGE 3′UTR靶向结合,Western blot及qRT-PCR证实miR-3188负向调控HGC-27细胞中NRAGE的蛋白表达水平,但不影响其mRNA表达水平,与miR-NC组相比,转染miR-3188 mim-ic可使HGC-27细胞增殖、侵袭及迁移能力降低,细胞凋亡率升高,而共转染pc-NRAGE可逆转上述作用;与miR-NC组相比,当HGC-27细胞中miR-3188过表达时,CyclinD 1、MMP 9、Bcl-2、N-cadherin、Vimentin表达水平下调,E-cadher-in蛋白表达水平上调,共转染pc-NRAGE可逆转上述作用.结论 miR-3188/NRAGE轴可能在胃癌发展过程中发挥重要作用,miR-3188可能是潜在的胃癌治疗靶点.