黄瓜绿斑驳花叶病毒SYBR Green Ⅰ实时荧光RT-PCR检测方法的建立

黄瓜绿斑驳花叶病毒(Cucumber green mottle mosaic virus,CGMMV)是我国重要的检疫性植物种传病毒,在世界各地均有发生,造成西瓜(Citrullus lanatus)、黄瓜(Cucumis sativus)、甜瓜(Cucumis melo)等作物的严重经济损失.CGMMV可由种子直接传播至下一代秧苗,为保障种子贸易顺利进行,有必要建立快速而准确的病毒检测方法.本研究以截获的带毒种子为材料,针对CGMMV建立了SYBR GreenⅠ实时荧光RT-PCR检测方法,其中设计筛选特异、灵敏的引物是关键.利用多次筛选得到的引物对建立了SYBR GreenⅠ实时荧光RT-PCR检测方法,实验结果表明该方法能够特异地检测CGMMV,不与其他侵染葫芦科植物的病毒发生交叉反应;灵敏度是RT-PCR方法的1000倍,是TaqMan探针实时荧光RT-PCR方法的100倍;且整个检测过程可在2.5 h内完成,是一种快速、灵敏、可靠的检测方法;应用该方法及TaqMan实时荧光RT-PCR方法同时对国内外198份种苗样品进行检测,结果显示kappa值大于0.82,说明两种方法具有高度一致性,本研究建立的SYBR GreenⅠ实时荧光RT-PCR方法有效、可靠,为种子快速通关提供新的技术手段.