木薯MeAHL19的互作蛋白筛选及鉴定

AT-hook核定位蛋白(AT-hook motif nuclear localized protein,AHL)是一类具有AT-hook基序的核定位蛋白,在植物生长发育过程中起着重要的调控作用.为探究木薯(Manihot esculenta)AHL家族成员MeAHL19的生物学功能以及其在蛋白互作网络中的作用.本研究采用T4连接法构建诱饵载体pGBKT7-MeAHL19,利用酵母(Saccharomyces cerevisiae)双杂交技术(yeast two-hybrid,Y2H)在木薯cDNA文库中筛选MeAHL19的互作蛋白,采用实时荧光定量PCR技术分析MeAHL19及其互作蛋白的基因表达模式.结果显示:酵母双杂交筛库获得20个阳性克隆,经PCR扩增并测序比对后鉴定出8个候选互作蛋白,Y2H回转验证发现,MeAHL19蛋白与核酮糖二磷酸羧化酶小链(ribulose bisphosphate carboxylase small chain,RBCS)蛋白可在体外互作;双分子荧光互补(bimolecular fluorescence complementation,BiFC)实验进一步验证了MeAHL19与RBCS在本氏烟草(Nocotinan benthamiana)叶肉细胞中发生互作.基因表达模式分析表明,MeAHL19主要在根中表达,而RBCS在根、茎和叶中的表达水平基本一致;MeAHL19与RBCS在木薯中共同响应非生物胁迫和外源激素应答.本研究为进一步探究MeAHL19在木薯逆境响应过程中的生物学功能提供了科学参考.