RACK1对人宫颈癌细胞增殖和凋亡的影响及其机制

目的 探讨激活性蛋白激酶C受体1(RACK1)对人宫颈癌细胞增殖和凋亡的影响及其潜在的机制.方法 收集2020年12月-2021年12月新疆医科大学第一附属医院24例患者的宫颈鳞癌(CSCC)组织及24例无宫颈病变的正常宫颈(NC)组织,采用qRT-PCR检测CSCC和NC组织中RACK1 mRNA的表达水平,并检测CSCC组织中增殖和凋亡相关基因c-myc、caspase-3、caspase-9、Bax、Bcl-2 mRNA的表达水平;采用Spearman秩相关分析CSCC组织中RACK1 mRNA与增殖和凋亡相关基因mRNA表达的相关性.采用qRT-PCR及Western blotting检测RACK1在宫颈癌细胞C33a、SiHa和正常宫颈内皮细胞H8中的表达情况.通过慢病毒转染C33a、SiHa细胞以沉默RACK1的表达,根据不同处理分为正常对照组(NC)、空载组(sh-NON)和沉默组1(shRACK1-1)、沉默组2(shRACK1-2),并验证细胞转染效率,采用MTT法及平板克隆实验检测细胞增殖能力,流式细胞术检测细胞凋亡水平,qRT-PCR检测RACK1沉默后各组细胞中c-myc、caspase-3、caspase-9、Bax、Bcl-2 mRNA的表达水平,Western blotting检测RACK1沉默后各组细胞中c-myc、caspase-3、caspase-9、Bax、Bcl-2以及磷酸化Janus激酶2(p-JAK2)、JAK2、磷酸化细胞信号传导与转录活化因子3(p-STAT3)、STAT3蛋白的表达水平.结果 CSCC组织RACK1 mRNA表达水平明显高于NC组织(P<0.001).Spearman秩相关分析结果显示,宫颈癌组织中RACK1 mRNA的表达水平与caspase-3(r=–0.679,P<0.001)、caspase-9(r=–0.735,P<0.001)、Bax(r=–0.691,P<0.001)mRNA表达水平呈明显负相关,而与c-myc(r=0.713,P<0.001)、Bcl-2(r=0.846,P<0.001)mRNA表达水平呈明显正相关.qRT-PCR与Western blotting检测结果显示,与H8细胞比较,C33a、SiHa细胞中RACK1 mRNA和蛋白表达水平均明显升高(P<0.001).RACK1沉默后,与sh-NON组及NC组比较,shRACK1-1组及shRACK1-2组RACK1 mRNA和蛋白表达水平明显降低(P<0.001).与sh-NON组比较,shRACK1-1组及shRACK1-2组细胞增殖和集落形成能力也明显降低(P<0.001),而细胞凋亡率明显增高(P<0.001).此外,与sh-NON组比较,shRACK1-1组及shRACK1-2组caspase-3、caspase-9、Bax mRNA和蛋白表达水平明显增高,p-JAK2、p-STAT3蛋白表达水平明显增高,而c-myc、Bcl-2 mRNA和蛋白表达水平明显降低(P<0.001或P<0.01).结论 RACK1在宫颈癌组织及细胞中呈现高表达,靶向沉默RACK1基因可有效降低增殖相关蛋白c-myc与抗凋亡蛋白Bcl-2的表达,但显著增加宫颈癌细胞中凋亡相关蛋白caspase-3、caspase-9、Bax的表达,可能与激活JAK2/STAT3信号通路有关.