Notch3调控Hes2逆转三阴性乳腺癌上皮-间质转化的机制研究

目的 探究Notch3逆转三阴性乳腺癌(TNBC)上皮-间质转化(EMT)及抑制肿瘤转移的分子机制.方法 将Notch3过表达质粒(pcDNA3.1-Notch3-GFP)及其阴性对照质粒(pcDNA3.1-NC-GFP)、Hes2敲低的小分子干扰质粒(si-Hes2-GFP)及其阴性对照质粒(si-NC-GFP)转染TNBC MDA-MB-231细胞,分为对照组(不进行任何转染)、pc-NC组(转染pcDNA3.1-NC-GFP)、Notch3过表达组(pc-Notch3组,转染pcDNA3.1-Notch3-GFP)、Notch3过表达+si-NC组(pc-Notch3+si-NC组,共转染pcDNA3.1-Notch3-GFP和si-NC-GFP)、Notch3过表达+Hes2敲低组(pc-Notch3+si-Hes2组,共转染pcDNA3.1-Notch3-GFP和si-Hes2-GFP).采用实时荧光定量PCR和Western blot分别检测细胞Notch3、Hes2 mRNA和蛋白表达;细胞计数试剂盒-8检测细胞增殖活性;划痕愈合实验和Transwell小室实验检测细胞迁移、侵袭能力;Western blot检测细胞EMT相关蛋白[E-钙黏蛋白(E-cadherin)和波形蛋白(Vimentin)]表达.结果 与对照组和pc-NC组比较,pc-Notch3组和pc-Notch3+si-NC组Notch3、Hes2 mRNA和蛋白、E-cadherin蛋白水平显著升高,细胞增殖活性、迁移率、穿膜细胞数、Vimentin蛋白水平显著降低(P<0.05);与pc-Notch3组和pc-Notch3+si-NC组比较,pc-Notch3+si-Hes2组Hes2 mRNA和蛋白、E-cadherin蛋白水平显著降低,细胞增殖活性、迁移率、穿膜细胞数、Vimentin蛋白水平显著升高(P<0.05).结论 Notch3可能通过上调Hes2来逆转TNBC的EMT,抑制肿瘤转移.