骨肉瘤组织中circ_0000880表达及其对细胞增殖的影响

目的 观察骨肉瘤组织和细胞株中环状RNA circ_0000880表达,及其对骨肉瘤细胞增殖的影响.方法 选取经病理确诊的骨肉瘤的标本共16例,采用circRNA高通量测序技术检测表达差异的circRNA.提取骨肉瘤及其癌旁组织总RNA,依据circ_0000880序列,设计divergent primer,扩增包含backsplice junction区域片段,随后连接入pGM-T载体进行测序鉴定.采用SYBR Green荧光定量PCR,分别检测骨肉瘤及其癌旁组织,骨肉瘤细胞MG63、SAOS-2、U20S及正常人成骨细胞 hFOB1.19 中 circ_0000880 的表达水平.将 circ_0000880 小干扰 RNA(siRNA)和circ_0000880 NC慢病毒转染至骨肉瘤细胞后检测细胞中circ_0000880的表达水平,并通过细胞计数试剂盒(CCK-8)及克隆形成实验检测对骨肉瘤细胞增殖的影响.两样本两组间比较用t检验.结果 采用circRNA高通量测序技术检测结果显示骨肉瘤组织及细胞中circ_0000880的表达显著上调,并通过测序鉴定证实circ_0000880在骨肉瘤组织中存在、且为环状RNA.反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)结果显示circ_0000880在骨肉瘤组织中的表达量(2.032±0.165)显著高于其癌旁组织(1.105±0.155,t=16.393,P＜0.05).circ_000088 在骨肉瘤细胞系 MG63(2.252±0.140)、SAOS-2(2.134±0.176)、U20S(2.011±0.226)中表达量均显著高于正常人成骨细胞(1.000±0.092,F=71.299,P＜0.05).转染 circ_0000880 siRNA 的 MG63 细胞中 circ_0000880 表达量明显下降(0.646±0.058),转染 circ_0000880 NC 的 MG63 细胞中 circ_0000880 表达水平(1.005±0.121)与空白组(1.000±0.201)比较差异无统计学意义(F=17.977,P＜0.05).CCK-8及克隆形成试验结果显示,与空白组和阴性对照组比较,转染circ 0000880 siRNA的骨肉瘤细胞增殖能力显著受到抑制.结论 骨肉瘤组织及细胞中circ_0000880表达显著上调,敲低circ_0000880表达可显著抑制骨肉瘤细胞的增殖能力.