嵌合抗原受体-T细胞免疫治疗中流式细胞术动态监测调节性-T淋巴细胞水平及其临床意义

目的:探究接受嵌合抗原受体（CAR）-T细胞免疫治疗的B细胞淋巴瘤患者外周血调节性T淋巴细胞（Treg）水平的变化特点，以及Treg水平与最佳疗效及治疗反应的联系。方法:回顾性研究2019年至2021年在武汉同济医院接受CD19/CD22 CAR-T细胞免疫治疗的23例复发/难治性B细胞恶性肿瘤患者的资料，依据Lugano修订版的淋巴瘤疗效评价标准将入组患者按照最佳疗效分为治疗后完全缓解（CR）组8例，部分缓解（PR）组7例及无效组（NR）8例。收集武汉同济医院同期16例未进行CAR-T细胞免疫治疗的B细胞淋巴瘤患者为对照组。在CAR-T细胞免疫治疗期间不同时间段，应用多色流式细胞术动态检测患者外周血中Treg占CD4 +T细胞比例（Treg/CD4 +T）、占淋巴细胞比例（Treg/Lym）、占白细胞比例（Treg/WBC）及Treg绝对数（Treg#），分析Treg水平随时间的变化趋势以及回输前后不同时间段内Treg占比及绝对数在不同最佳疗效患者组别中的差异。根据CAR-T细胞回输后1~15 d内Treg占比和绝对数中位数水平将患者分为低水平组11例及高水平组12例，比较各组间CAR-T拷贝数峰值、铁蛋白峰值、白细胞介素6（IL-6）峰值的统计学差异。统计学分析采用独立样本 t检验，曼-惠特尼 U检验、Cox-Stuart趋势存在性检验及单因素方差分析。 结果:接受CAR-T细胞免疫治疗的23例患者，清淋预处理后CAR-T细胞输注前Treg/CD4 +T及Treg/Lym均值分别为（20.42±7.96）%及（13.61±7.13）%，显著高于对照组Treg/CD4 +T均值［（7.33±3.61）%， t=5.893， P<0.001］及Treg/Lym均值［（1.91±0.90）%， t=6.53， P<0.001］。同期Treg#均值（1.81±1.52）/μl明显低于对照组均值［（13.66±9.89）/μl， t=4.261， P<0.001］。回输CAR-T细胞后，Treg/CD4 +T与Treg/Lym均有降低趋势（ P<0.001），Treg/WBC有升高趋势（ P=0.01）。最佳疗效为CR组的患者回输前Treg/CD4 +T（12.87±1.93）%、Treg/Lym（6.35±2.84）%、Treg/WBC（0.05±0.05）%均值均明显低于PR组［（29.68±5.49）%（ P<0.01），（21.85±2.10）%（ P<0.01），0.50±0.69（ P<0.05）］。回输CAR-T细胞后1~15 d内Treg/CD4 +T均值较低的患者，CAR-T拷贝数峰值更高（ P<0.05）。 结论:B细胞恶性肿瘤患者在接受CAR-T细胞免疫治疗过程中，Treg/CD4 +T与Treg/Lym先增高后降低。预处理后CAR-T输注前外周血Treg细胞占比较低的患者疗效更好，CAR-T 输注后早期Treg/CD4 +T 水平相对低的患者CAR-T 细胞的扩增更好，在CAR-T细胞免疫治疗过程中利用多色流式细胞术对Treg比例进行动态监测，对免疫治疗最佳疗效以及治疗反应的预测均有一定的临床意义。