小鼠抗人B7-1单克隆抗体抑制肿瘤细胞增殖的蛋白质组学分析

目的:研究鼠抗人单克隆抗体B7-1对恶性肿瘤细胞株Daudi(天然表达B7-1分子)体外生长、蛋白表达谱及信号通路的影响.方法:①采用诱生腹水法制备小鼠抗人B7-1单克隆抗体(4E5 mAb),应用Protein A免疫层析法进行亲和纯化,流式细胞术对其纯化后产物的活性进行识别鉴定;②利用MTT法检测不同浓度的4E5 mAb(5、10、20、40μg/ml)对Daudi细胞体外增殖的影响;③应用Label-free蛋白定量技术分析比较4E5 mAb(20μg/ml)处理Daudi细胞48 h后与其对照组(同型对照IgG)蛋白质的差异表达情况,采用平行反应监测(PRM)对差异表达蛋白进行定量验证;④根据蛋白质的GO注释和生物信息学工具KEGG数据库将鉴定出来的差异蛋白质进行生物信息学富集分析.结果:①获得单克隆抗体的量为3.83 mg/ml,该抗体与Daudi肿瘤细胞的阳性结合率为93.7％;②当抗体终浓度为20μg/ml时,4E5 mAb显著抑制Daudi细胞的增殖;③与IgG对照组相比,4E5实验组鉴别出169个蛋白质的定量水平差异有统计学意义,其中131个蛋白质表达呈上调趋势,38个蛋白表达水平呈下调趋势,PRM对差异蛋白定量验证的结果与蛋白组学结果完全一致;④GO数据库分析的差异表达蛋白主要来自线粒体、内质网膜、高尔基体、核质等细胞器,其中又以线粒体附近分布最多,多数参与线粒体翻译延伸和终止、细胞增殖、mRNA剪接、翻译、细胞内蛋白运输等功能.生物信息学工具KEGG富集分析显示差异蛋白主要参与Daudi细胞增殖相关的通路,如PI3K-Akt、Ras、DNA replication、AMPK、mTOR、Hippo、VEGF、FoxO、Metabolic等.结论:小鼠抗人B7-1 mAb不仅可以通过与肿瘤细胞膜表面的B7-1分子特异性结合进行相互作用,还能显著抑制天然表达B7-1分子的肿瘤细胞的增殖,且与B7-1 mAb结合后明显改变了肿瘤细胞中蛋白表达谱及与增殖相关的信号通路.