温阳化浊通络方含药血清抑制硬皮病患者Th17细胞增殖的作用机制研究

目的 研究温阳化浊通络方含药血清对维甲酸相关孤核受体(RORγt)表达及甲基化的影响,探讨其调控辅助性T细胞17(Th17)增殖从而治疗硬皮病的作用机制.方法 分别灌胃Wistar大鼠15、30、60g/(kg·d)温阳化浊通络方药液后制备不同剂量的含药血清,同时收集硬皮病患者外周血分选Th17细胞.以空白血清作为空白对照,甲基化转移酶抑制剂地西他滨(DCA)作为阳性对照,用不同剂量含药血清处理Th17细胞后,采用CCK-8法检测Th17细胞的增殖,采用qRT-PCR法检测细胞中RORyt、白细胞介素17(IL-17)mRNA的表达,采用Western blot法检测细胞中RORyt蛋白表达,采用酶联免疫吸附测定法检测细胞上清液中IL-17蛋白表达,采用甲基化特异性PCR法检测细胞中RORγt基因启动子甲基化水平,并采用双荧光素酶法检测细胞中RORγt基因启动子的转录活性.结果 与空白对照比较,各剂量温阳化浊通络方含药血清和DCA均可抑制Th17细胞的增殖(P＜0.05),降低RORγt、IL-17mRNA及其蛋白的表达水平,提高RORγt基因启动子甲基化水平,减弱RORγt基因启动子转录活性;其中除含药血清低剂量组Th17 mRNA表达水平和RORγt基因启动子甲基化水平外,其余各组上述指标差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 温阳化浊通络方可通过促进RORγt基因甲基化,抑制RORyt表达及IL-17分泌,进而抑制Th17细胞的增殖.