免疫缺陷小鼠体内人源T淋巴细胞亚群流式检测方法研究

目的 比较流式细胞术(FCM)与活体成像法、qPCR法识别外周血CAR+细胞的结果,验证其结果的可靠性和灵敏性.方法 分别给予免疫缺陷型荷瘤(Raji-Luc细胞造模)小鼠溶媒、CAR-T1或CAR-T2细胞.在不同时间点测定动物体内Raji-Luc细胞的荧光强度,FCM法测定人源T淋巴细胞和CAR-T细胞中的CD3+CD4+和CD3+CD8+个数,并使用qPCR法检测外周血中每纳克基因组DNA中CAR-T1和CAR-T2拷贝数.结果 CAR-T1组动物体内T细胞及CAR-T细胞数量在给予细胞后第5～7周大幅增加.CAR-T2组动物体内T细胞及CAR-T细胞数量在给予细胞后第10～14天大幅增加,之后大幅降低,给予细胞后第4周降至基线且未见再次扩增.CAR-T细胞的流式检测结果与活体成像结果基本相符,且与qPCR法检测外周血中CAR-T细胞的分布趋势基本一致.此外,EDTA-K2抗凝剂对FITC标记的抗CD8+抗体有较明显的影响,导致标记为CD3+CD8+的细胞群左移且检测结果为零.结论 对不同增殖特性的CAR-T细胞,流式检测结果与其体内肿瘤杀伤情况相关,且比qPCR法更为准确和灵敏,为CAR-T细胞的非临床安全性评价试验设计提供有益借鉴.