埃可病毒11型抗体的制备及其ELISA定量检测方法的建立、应用

目的 制备埃可病毒11型(Echovirus 11,Echo11)鼠单抗及兔多抗,建立Echo11抗原定量检测方法.方法 以制备的Echo11病毒颗粒抗原作为免疫原,分别免疫BALB/c小鼠和家兔,制备Echo11鼠单抗和兔多抗.建立Echo11病毒抗原定量检测方法,对其进行方法学验证和初步应用.结果 分别制备了效价为1 ∶ 1×106和1 ∶1×108的Echo11兔多克隆抗体(多抗)及鼠单克隆抗体(单抗),建立了双抗夹心ELISA抗原定量检测方法,该方法在4.0～16.0 μg/mL范围内线性关系良好,R2＞0.99;高、中、低3个浓度样品准确度验证回收率在96.9％～107.5％之间;板内精密度验证CV分别为7.4％、3.6％、4.2％;板间精密度验证CV分别为11.6％、6.8％、4.6％;特异性验证结果显示,制备的抗体与Echo11之外的抗原均无交叉反应;稳定性验证结果显示,样品CV均＜3％.结论 制备了 Ech-o11 鼠单抗及兔多抗,建立了 Echo11抗原定量ELISA检测方法,该法可应用于Echo11病毒抗原制备过程中样品的检测,为Echo11疫苗的研发提供了质控方法.