阿昔莫司对高糖诱导心肌细胞损伤保护作用机制研究

目的 探讨阿昔莫司对高糖诱导的心肌细胞氧化应激损伤的影响,探讨其保护作用机制.方法 取大鼠心肌H9C2细胞,分为对照组、低糖组、等渗组、高糖组,采用MTT法检测各组细胞存活率,Western blot法检测超氧化物歧化酶(SOD)及脂蛋白脂肪酶(LPL)表达水平.在高糖(30 mmol/L)条件下,用不同浓度阿昔莫司(0、5、10、25、50μg/L)干预处理培养24 h,检测细胞存活力及SOD、LPL水平.敲低SOD,并分为空白组、高糖组、阿昔莫司组(25μg/L)、Si-SOD组(转染SOD低表达序列腺病毒载体)、Si-NC组(转染不含Si-SOD序列的腺病毒空载体)、阿昔莫司+Si-SOD组;MMT法检测细胞存活率;透射电镜检测细胞超微结构;油红O染色观察脂质堆积;免疫荧光检测活性氧簇(ROS)蓄积;TUNEL法检测细胞凋亡;Western blot法测定LPL、抗氧化酶-超氧化物歧化酶2(SOD2)、脂质过氧化物酶体增殖物激活受体α(PPARα)、谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)、过氧化氢酶(CAT)、心肌细胞脂质代谢相关指标-细胞膜糖蛋白(CD36)、葡萄糖转运蛋白4(GLUT4)蛋白表达.结果 糖浓度越高,心肌细胞存活率及SOD蛋白表达越低,LPL表达越高(P<0.05).高糖条件下,阿昔莫司干预浓度越高,心肌细胞存活率及SOD蛋白表达越高,LPL表达越低(P<0.05).敲低SOD后,细胞脂质堆积、ROS蓄积、氧化应激损伤及凋亡越严重,PPARα介导的脂代谢异常途径活化越高,SOD抗氧化途径受到抑制(P<0.05).阿昔莫司可提高高糖条件下细胞存活率,缓解氧化应激损伤及脂质堆积,抑制PPARα活化,并促进SOD抗氧化途径激活(P<0.05),但其作用可被Si-SOD逆转(P<0.05).结论 阿昔莫司通过抑制PPARα活化,升高SOD、GPx、CAT抗氧化相关蛋白表达,缓解脂质堆积及氧化应激损伤,对高糖诱导条件下心肌细胞起保护作用.