布鲁氏菌粗糙型RA343株与光滑型A19株免疫小鼠后特异性T细胞和抗体动态变化分析

[背景]布鲁氏菌病(简称布病)严重威胁着人类健康和畜牧业的发展,使用毒力弱、免疫原性好、不干扰血清学诊断的疫苗是防控布病的有效措施.[目的]比较布鲁氏菌粗糙型RA343株与光滑型A19株免疫小鼠后机体特异性T细胞和抗体的动态变化,评价粗糙型RA343株的免疫效果.[方法]采用6周龄雌性BALB/c小鼠,共分为3组,RA343株免疫组和A19株免疫组各15只小鼠,空白对照组5只小鼠.免疫组的每只小鼠经腹股沟皮下注射0.1 mL(含菌量为1×108 CFU)菌液.免疫后1、2和3周各免疫组及空白对照组分别剖杀5只小鼠,无菌取脾脏,一部分脾脏研磨分离淋巴细胞,用流式细胞术检测小鼠布鲁氏菌特异性CD4+T细胞与CD8+T细胞所占比例的变化趋势;另一部分脾脏称重后分离布鲁氏菌RA343株和A19株,评估RA343株和A19株在小鼠脾脏中的定殖情况.在剖杀小鼠的同时取外周血分离血清,用ELISA方法检测免疫后小鼠血清中IgM和IgG抗体的消长规律.采用GraphPad Prism 8.0软件作图并进行统计学分析.[结果]与A19免疫组相比,免疫后1周,RA343免疫组小鼠脾脏布鲁氏菌特异性CD4+IFN-γ所占比例极显著增加(P＜0.01),CD4+IL-2、CD8+IL-2和CD8+TNF-α所占比例显著增加(P＜0.05);免疫后2周,RA343免疫组特异性CD4+TNF-α所占比例极显著增加(P＜0.01),CD8+TNF-α所占比例显著增加(P＜0.05);免疫后3周,CD4+TNF-α所占比例显著增加(P＜0.05),CD8+1FN-γ所占比例极显著增加(P＜0.01).免疫后1-3周,RA343免疫组小鼠脾脏含菌量显著低于A19免疫组(P＜0.05),而且RA343免疫组脾脏重量低于A19免疫组.光滑型A19株免疫小鼠的IgM和IgG抗体水平在免疫后2周均显著升高;粗糙型RA343株免疫小鼠的IgM和IgG抗体采用光滑型抗原进行ELISA检测结果均为阴性.[结论]与光滑型A19株相比,布鲁氏菌粗糙型RA343株诱导的细胞免疫应答较强,而且RA343组小鼠脾脏含菌量显著低于A19组,产生抗体与光滑型布鲁氏菌抗原无交叉血清学反应,综合表明布鲁氏菌粗糙型RA343株毒力弱,免疫小鼠后可产生良好的细胞免疫反应和体液免疫反应且不干扰血清学诊断,是理想的布鲁氏菌疫苗候选株.