百日咳鲍特菌脉冲场凝胶电泳分子分型方法的优化和应用

目的 优化百日咳鲍特菌(Bordetella pertussis,B.P)脉冲场凝胶电泳(Pulsed field gel electrophoresis,PFGE)分型方法.方法 依据已发表文献和实验室现有条件,优化B.P的PFGE电泳条件和条带标准化方法,将优化后的方法用于分析贵州省B.P分离株.结果 当采用XbaI内切酶时B.P PFGE的最优脉冲时间、电泳时长分别为5-21s、20h,当采用SpeI内切酶时分别为5-45s、22h.同时使用两种内切酶时,λ Ladder电泳图谱比H9812菌株电泳图谱更适合作为B.PPFGE分析的标准化参考.2017-2018年贵州省16株B.P分离株采用XbaI可分为16种谱型(PX01-PX16),采用 SpeI 可分为 12 种谱型(PS01-PS12),XbaI 的分辨力(DI=0.937 5)高于 SpeI(DI=0.906 3).结论 优化后的方法更适于B.P PFGE分析;贵州省B.P分离株的PFGE谱型存在多态性.