致犊牛脑炎大肠杆菌Flic3和FimD蛋白的生物信息学分析及克隆表达

为了对致犊牛脑炎大肠杆菌S9922的Flic3、FimD蛋白进行生物信息学分析,并进行诱导表达,试验利用在线分析软件对Flic3、FimD蛋白进行生物信息学分析,利用PCR技术扩增Flic3和FimD基因,构建重组质粒pET32a-Flic3和pET32a-FimD,转化BL21(DE3)大肠杆菌感受态进行原核表达,并进行SDS-PAGE分析和 Western-blot检测.结果表明:Flic3蛋白的原子组成为C1381H2284N412O496S5,理论等电点为5.08,含有2个糖基化位点,α-螺旋、β-转角、β-片层和无规则卷曲分别占48.24％、6.39％、18.85％、26.52％,有13个可能的抗原表位.FimD蛋白的原子组成为C1828H2798N510O588S9,理论等电点为6.16,含有8个糖基化位点,α-螺旋、β-转角、β-片层和无规则卷曲分别占6.54％、5.50％、32.94％、56.02％,有15个潜在的抗原表位.Flic3和FimD蛋白都是亲水、稳定蛋白,都不含跨膜区和信号肽.SDS-PAGE分析结果显示,重组蛋白Flic3大小为51 ku,重组蛋白FimD大小为59 ku,皆以包涵体形式表达.Western-blot检测后目的条带与预期一致,具有良好的免疫原性.说明Flic3和FimD蛋白原核表达成功,可用于制备致犊牛脑炎大肠杆菌疫苗.