安五脂素对α-黑色素细胞刺激素诱导的小鼠黑色素瘤B16F10细胞中黑色素生成的影响及机制

目的 研究安五脂素对小鼠黑色素瘤B16F10细胞黑色素生成的影响及机制.方法 体外培养B16F10细胞,用MTT法检测B16F10细胞存活率.随后实验分为细胞对照组、α-黑色素细胞刺激素(α-MSH)诱导模型组和模型+安五脂素5,10和20μmol·L-1组,培养48 h.NaOH裂解法和多巴氧化速率法检测细胞内黑色素含量和酪氨酸酶活性,WST-1法检测细胞内超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)水平,化学荧光法检测活性氧(ROS)水平,实时-定量PCR检测血红素加氧酶1(HO-1)mRNA表达水平,Western印迹法检测核因子E2相关因子2(Nrf-2)和HO-1蛋白表达水平.结果 安五脂素5,10和20μmol·L-1对B16F10细胞存活无影响.与细胞对照组相比,模型组黑色素含量和酪氨酸酶活性显著升高(P<0.01);SOD活性降低(P<0.01),MDA和ROS水平升高(P<0.01);Nrf-2蛋白及下游HO-1 mRNA和蛋白表达显著降低(P<0.01).与模型组相比,模型+安五脂素10和20μmol·L-1组B16F10细胞黑色素含量和酪氨酸酶活性降低(P<0.05,P<0.01);SOD活性升高(P<0.01),MDA和ROS含量明显降低(P<0.05,P<0.01);Nrf-2蛋白及下游HO-1 mRNA和蛋白表达水平升高(P<0.01).结论 安五脂素可能通过抑制B16F10细胞氧化应激反应而抑制其黑色素合成,且可能与抑制Nrf-2/HO-1信号通路有关.